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外泌体的核心价值：从治疗到诊断突破
外泌体（exosomes）是一种富含蛋白质、脂质及功能性RNA，直径约40–160 nm的细胞外囊泡，可稳定存在于多种体液中。其内容物能够反映起源细胞的生理或病理状态，在疾病发生发展与治疗响应等生物过程中起到胞间通讯的作用。
根据外泌体的独特生物学活性，其临床应用领域大致分为三种：
特殊细胞来源外泌体继承其起源细胞的部分功能，甚至比起源细胞具有更强的功能性和治疗便利性，可通过调节免疫应答、促进血管生成、调节细胞增殖凋亡等途径发挥治疗作用；
基于其良好的生物相容性和生物学功能，以及其可跨越生物屏障、稳定性高、毒性低的特点，使它在药物递送领域呈现出巨大优势；
外泌体有丰富且稳定的内含信息，且与疾病过程高度相关，在生物标志物的开发和应用中展现出广泛的适用性。
临床进展：
来自于FDA 临床试验备案数据库（ClinicalTrails.gov）显示目前FDA已有60余项涉及外泌体临床试验的相关备案（统计区间：2020年1月~2025年6月），覆盖呼吸系统疾病、皮肤疾病、骨关节疾病、心脑血管疾病、消化系统疾病等多个领域，显示出全球对外泌体医疗应用的高度关注。
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外泌体miRNA：液体活检的“黄金标志物”
液体活检诊断技术是一种基于体液样本，用于检查分子标志物、肿瘤细胞及其代谢物变化的方法。较组织活检而言，对患者几乎无创，在早期筛查和肿瘤进展监测中展现出旷阔前景。
miRNA是一种长度约22nt的非编码单链RNA，在人类种约有2000~3000种，通常可起到识别目标mRNA 3’非翻译区，抑制蛋白质翻译的作用。大量研究发现，外泌体中的miRNA广泛存在于体液中，且分布具有高灵敏度和特异性。与正常组织相比，肿瘤中的外泌体miRNA显著增加，且其特性高度稳定。不同细胞来源的外泌体具有独特的miRNA表达谱，反之，独特的miRNA表达谱可作为鉴别外泌体细胞和组织来源的生物标志物。
血浆外泌体在不同储存条件下均表现出较好的稳定性。已有研究表明，于-20℃条件下储存5年的血浆，其中外泌体RNA总量及单个miRNA水平与新鲜样本无显著性差异。冻融2次的血浆外泌体RNA总量及单个miRNA水平受影响较小。
基于其稳定、易采集和内容物特异的特点，外泌体miRNA被认为是最具潜力的非侵入式生物标志物之一，广泛应用于早期诊断、预后评估和药物反应监测等场景。
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益诺思高效专业的
外泌体测序全流程技术平台与服务
外泌体miRNA测序工作原理可分6个步骤：
样本采集和预处理
外泌体miRNA测序适用于多来源样本千层金配资，包括血浆、脑脊液、唾液、尿液、细胞培养上清等。为避免胞内RNA干扰，样本采集分离后需立即置于冰上或4℃暂存，尽快进行二次离心，去除细胞及细胞碎片，后于-80℃保存运输，避免反复冻融。
外泌体分离
针对不同样本类型和研究需求，外泌体可通过超速离心、膜亲和、体积排阻色谱、亲和捕获等方法从样本中分离。基于细胞外囊泡研究国际指南（MISEV2023）中的建议，益诺思使用分子尺寸排阻法进行外泌体分离，该方法重复性好，能有效去除小粒径杂质，不依赖抗原结合，可最大限度保留外泌体的多样性、完整性和生物活性。
RNA提取
使用专用低丰度小RNA提取试剂盒，提取外泌体中RNA，保证miRNA回收率。
文库制备
使用适用于miRNA的建库流程，于外泌体miRNA两端连接3’和5’测序Adapter，后将RNA反转录为DNA，并对DNA进行PCR扩增及文库构建，对扩增产物进行片段分选，后使用片段分析仪对文库进行质控。
上机测序
使用miRNA专用的单端测序试剂芯片，对miRNA文库进行二代测序。
生信分析
将下机数据进行预处理，后通过参考数据库比对和miRNA预测进行miRNA鉴定，对miRNA reads进行定量及差异表达分析。根据不同需求，可定制靶基因预测及通路富集分析，以反应潜在作用途径。
外泌体miRNA生物标志物测序流程图
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益诺思外泌体miRNA生物标志物研究思路
益诺思拥有二代测序技与生物信息分析平台，可对外泌体miRNA进行高通量筛选，得到候选外泌体miRNA生物标志物，结合RT-PCR技术验证，助力疾病相关生物标志物发现。
外泌体miRNA生物标志物鉴定研究思路
差异外泌体miRNA筛选：选择较小的患者及健康人群体作为发现集，使用二代测序及生信分析方法，鉴定两组miRNA的表达水平差异，确定候选外泌体miRNA。
外泌体miRNA初步验证：设计引物探针，使用发现集作为样本，通过RT-PCR验证候选外泌体miRNA。
外泌体miRNA大队列验证：扩大样本量作为新验证集，将初步验证的候选外泌体miRNA于扩大验证集中进行RT-PCR验证，获得外泌体miRNA生物标志物。
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益诺思NGS平台 从样本存储运输到下机数据 个性化分析的一站式服务
益诺思二代测序平台提供从样本存储运输到下机数据个性化分析的一站式服务，配备先进仪器与专业的服务团队。平台可承接WGS、WES、mRNA测序、TCR免疫组库测序、扩增子测序、单细胞测序相关业务千层金配资，为细胞基因疗法、脱靶检测、生物标志物发现等相关研究提供支持。
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